穩(wěn)定細胞株的篩選 服務介紹

穩(wěn)定細胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到染色體中，用載體中所含的抗性標志進行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白，或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細胞株。常用物理方法（電轉(zhuǎn)）、化學方法（脂質(zhì)體等）、生物方法（病毒）。

穩(wěn)定細胞株的篩選  實驗原理

外源基因在細胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，一類是穩(wěn)定表達（又叫表達）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩(wěn)定細胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物對靶細胞進行篩選。常用的抗性標記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin）。

實驗流程：

1、載體構(gòu)建（表達質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2、轉(zhuǎn)染/感染；

3、目的蛋白初步檢測；

4、抗生素篩選；

5、目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6、單克隆細胞株穩(wěn)定性檢測。

客戶提供：培養(yǎng)好的細胞

公司提供：基本實驗步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達細胞株

實驗周期：大約3-4月左右，具體需要根據(jù)細胞實驗內(nèi)容而定。