真核基因轉染實驗

一、服務介紹

細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。目前，將外源物質導入細胞的方法主要分為三大類：1、脂質體（或是脂質體替代物）轉染；2、電轉；3、病毒感染。轉染技術又可分為瞬時轉染和穩(wěn)定轉染。

基因的功能研究可分為loss-of-function和gain-of-function，即通過過表達該基因和抑制內源基因的表達的手段來研究某個基因的生物學功能。常規(guī)轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（轉染）。

真核基因轉染實驗 瞬時轉染

服務介紹

通過脂質體介導轉染法基因轉染技術，將靶基因導入細胞，一般在轉染后48小時左右，靶基因即可在細胞內表達。根據不同的實驗目的，48小時后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。觀察目的基因及其表達蛋白在某種細胞中的功能（短時間即可進行觀察，但效應會很快丟失）

服務流程

1、接收質粒、細胞

2、細胞培養(yǎng)

3、轉染

4、拍照

5、效率鑒定

客戶提供：

1、構建好的外源基因載體，或由本公司進行載體構建（需提供目的基因名稱、種屬、序列或Gene Accession Number）。

2、待轉染的細胞系（1×10⁶個細胞，可傳代，倍增時間小于48小時）以及細胞培養(yǎng)條件的說明。

3、若需要檢測靶基因的表達，需提供相應抗體或由公司代購。

交付內容

1、構建好的瞬時轉染細胞。

2、實驗報告：詳細實驗步驟及相關的外源基因表達分析。

穩(wěn)定轉染細胞株的構建

服務介紹

穩(wěn)定轉染，就是轉染的質粒DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞進行篩選或者應用高轉染效率的病毒，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物進行細胞傳代，從而得到可穩(wěn)定表達目的基因的細胞系。

服務流程

1、接收質粒、細胞

2、細胞培養(yǎng)

3、轉染

4、抗生素篩選

5、得到單克隆細胞株

6、擴增

7、檢測

客戶提供

1、構建好的外源基因載體，或選擇由公司構建（價格參考載體構建）。

2、待轉染的細胞系（1×106個細胞，可傳代，倍增時間小于48小時）以及細胞培養(yǎng)條件的說明。

3、提供相應抗體

交付內容

1、構建好的穩(wěn)定表達細胞系。

2、實驗報告：詳細步驟、相關的外源基因表達分析等。

二、服務列表

項目
 備注
 周期
 
瞬時轉染+鑒定
 鑒定方法為western blot
 10個工作日
 
穩(wěn)定轉染+鑒定
 鑒定方法為western blot
 45個工作日(貼壁細胞)